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胃蛋白酶原II(PGII)-磁微粒化学发光法(AE/AP)/荧光免疫层析解决方案(含保护剂评估)

发布时间:2024-10-28 点击数:7
1.项目背景    
摘自《中国胃癌筛查与早诊早治指南(2022)》
PG是胃蛋白酶的无活性前体,可分为PGI和PGII种亚型。PGI主要由胃体和胃底腺的主细胞和颈黏液细胞分泌,而 PGII除由胃底腺分泌外,胃窦幽门腺和近端十二指肠 Brunner腺亦可分泌。当胃黏膜发生萎缩时,血清PGI水平和(或)PGI/II比值(PGR)降低。血清中约存在人体1%的PG,其血清水平可作为胃黏膜形态和功能状态的标志,联合Hp检测可识别出胃癌的高危个体。一项纳入27项人群筛查研究和15项针对特定高危人群(如萎缩性胃炎)研究、涉及约30万例受试者的Meta分析结果显示,在一般人群研究中血清PG(PGI≤70ng/ml,PGR≤3)检测诊断胃癌的灵敏度和特异度分别为77%和73%,在特定高危人群中灵敏度和特异度分别为57%和80%。 另有3项 Meta分析评估了PG检测对胃癌诊断的灵敏度和特异度,结果显示,血清PG检测对胃癌诊断的灵敏度和特异度分别为57%~69%和 73%~85%。
2.性能表现    
针对PGII的检测,西宝生物推出4种单克隆抗体和1种重组抗原适合化学发光(AE/AP)和荧光层析平台。具体性能如下
(以下评估仅代表在西宝生物的工艺体系下的验证,建议客户根据自身工艺进行抗体交叉配对验证)。
2.1化学发光(AE)平台:    
组合1(两试剂模式):    
胃蛋白酶原II(PGII)抗体(货号:EKN0290D)包被羧基磁珠+胃蛋白酶原II(PGII)抗体(货号:EKN0289D)标记吖啶酯;    
组合2(三试剂模式):    
胃蛋白酶原II(PGII)抗体(货号:EKN0290D)标记生物素+胃蛋白酶原II(PGII)抗体(货号:EKN0289D)标记吖啶酯+链酶亲和素磁珠(SA)(货号:DEG0814A);    
组合3(三试剂模式):    
胃蛋白酶原II(PGII)抗体(货号:EKN0289D)标记生物素+胃蛋白酶原II(PGII)抗体(货号:EKN0290D)标记吖啶酯+链酶亲和素磁珠(SA)(货号:DEG0814A);    
线性范围:0.5ng/mL-100ng/mL;最低检出限:0.5ng/mL。
浓度值在1000ng/mL以内没有发现高剂量钩状效应(HOOK效应)。
   
   
   
2.2化学发光(AP)平台:    
组合4(两试剂模式):    
胃蛋白酶原II(PGII)抗体(货号:EKN0289E)包被羧基磁珠+胃蛋白酶原II(PGII)抗体(货号:EKN0290E)标记碱性磷酸酶;    
组合5(三试剂模式):    
胃蛋白酶原II(PGII)抗体(货号:EKN0289E)标记生物素+胃蛋白酶原II(PGII)抗体(货号:EKN0290E)标记碱性磷酸酶+链酶亲和素磁珠(SA)(货号:DEG0814A)。    
线性范围:0.5ng/mL-100ng/mL;最低检出限:0.5ng/mL。
浓度值在1000ng/mL以内没有发现高剂量钩状效应(HOOK效应)。
   
   
2.3荧光免疫层析平台:    
组合6:    
胃蛋白酶原II(PGII)抗体(货号:EKN0289E)标记荧光微球+胃蛋白酶原II(PGII)抗体(货号:EKN0290E)划膜;    
线性范围:0.5ng/mL-100ng/mL;最低检出限:0.5ng/mL。
浓度值在1000ng/mL以内没有发现高剂量钩状效应(HOOK效应)。
   
2.4 稳定性评估    
2.4.1 碱性磷酸酶标记抗体稳定性    
A)胃蛋白酶原II(PGII)抗体(货号:EKN0290E)标记碱性磷酸酶浓缩液采用AP酶标记物稀释液(货号:DCD0519A)稀释到合适浓度后,进行37℃热稳定性实验。如表1所示,PGII ALP酶工作液37℃储存热加速3天与2℃-8℃储存3天发光值平均降幅超过30%以上,表明PGII ALP酶工作液热稳定性差。
表1 PGII ALP酶工作液热稳定性3天数据(不含保护剂)    
序号
PGII质控品浓度ng/mL
PGII ALP酶工作液37℃储存热加速3天与2℃-8℃储存3天发光值均值差异
Q1
5
-31.0%
Q2
12.5
-35.5%
Q3
50
-33.6%
平均变化                        
-33.4%                        
B)在AP酶标记物稀释液(货号:DCD0519A)中添加20%左右的蛋白保护剂GH(货号:DCL0009A)配成新的AP酶稀释液,继续进行胃蛋白酶原II(PGII)抗体(货号:EKN0290E)标记碱性磷酸酶的37℃热稳定性实验。如表2所示,PGII ALP酶工作液37℃储存热加速7天与2℃-8℃储存7天发光值平均降幅在10%左右,表明PGII ALP酶工作液热稳定性良好。本实验表明蛋白保护剂GH(货号:DCL0009A)对PGII ALP酶工作液的稳定性有很大帮助
表2 PGII ALP酶工作液热稳定性7天数据(含保护剂)    
序号
PGII质控品浓度ng/mL
PGII ALP酶工作液37℃储存热加速7天与2℃-8℃储存7天发光值均值差异
Q1
5
-8.1%
Q2
12.5
-10.5%
Q3
50
-9.9%
平均变化                        
-9.5%                        
2.4.2 PGII抗原稳定性    
A)采用PGII抗原稀释液(货号:DCD0521A)将PGII抗原(货号:EKY0732B)稀释成3个梯度(液体型),进行37℃热稳定性实验。如表3所示,PGII抗原稀释梯度(液体型)37℃热加速3天与2℃-8℃储存3天发光值平均降幅超过80%以上,表明PGII抗原稀释梯度(液体型)热稳定性非常差。
表3 PGII抗原稀释梯度(液体型)热稳定性3天数据    
序号
PGII 质控品浓度ng/mL
PGII 抗原稀释梯度(液体型)37℃热加速3天与2℃-8℃储存3天发光值均值差异
Q1
5
-85.0%
Q2
12.5
-85.1%
Q3
50
-87.1%
平均变化                        
-85.7%                        
B)采用PGII抗原稀释液(货号:DCD0521A)将PGII抗原(货号:EKY0732B)稀释成3个梯度做冻干(冻干型),进行37℃热稳定性实验。如表4所示,PGII抗原稀释梯度(冻干型)37℃热加速7天与2℃-8℃储存7天发光值平均降幅在5%左右,表明PGII抗原稀释梯度(冻干型)热稳定性良好。
表4 PGII抗原稀释梯度(冻干型)热稳定性7天数据    
序号
PGII 质控品浓度ng/mL
PGII 抗原稀释梯度(冻干型)37℃热加速7天与2℃-8℃储存7天发光值均值差异
Q1
5
-3.9%
Q2
12.5
-3.7%
Q3
50
-2.9%
平均变化                        
-3.5%                        
3.临床相关性    
3.1化学发光(AE)平台:    
西宝生物发光(AE)平台PGII抗体配对组合1(两试剂模式)与迈瑞医疗PGII试剂(化学发光法)赋值的临床样本相关性R2>0.95,相关性良好;
   
   
西宝生物发光(AE)平台PGII抗体配对组合2(三试剂模式)与迈瑞医疗PGII试剂(化学发光法)赋值的临床样本相关性R2>0.95,相关性良好。
   
   
西宝生物发光(AE)平台PGII抗体配对组合3(三试剂模式)与迈瑞医疗PGII试剂(化学发光法)赋值的临床样本相关性R2>0.95,相关性良好。
   
   
3.2化学发光(AP)平台:    
西宝生物发光(AP)平台PGII抗体配对组合4(两试剂模式)与迈瑞医疗PGII试剂(化学发光法)赋值的临床样本相关性R2>0.95,相关性良好;
   
   
西宝生物发光(AP)平台PGII抗体配对组合5(三试剂模式)与迈瑞医疗PGII试剂(化学发光法)赋值的临床样本相关性R2>0.95,相关性良好。
   
   
3.3荧光免疫层析平台:    
西宝生物荧光平台PGII抗体配对组合6与迈瑞医疗PGII试剂(化学发光法)赋值的临床样本相关性(≤20ng/mL)R2在0.90左右,相关性较好;(<100ng/mL)R2>0.95,相关性良好。
   
   
4. 测试方案    
4.1化学发光(AE)平台    
4.1.1抗体配对组合1(两试剂模式):    
待测抗原:PGII抗原(货号:EKY0732B)
样本/校准品:样品加样量20ul;
试剂1:胃蛋白酶原II(PGI)抗体(货号:EKN0290D)包被-磁珠稀释物,用量50ul/测试;
试剂2:胃蛋白酶原II(PGI)抗体(货号:EKN0289D)标记-吖啶酯稀释物,用量50ul/测试;
反应条件:
第一步:20ul样品+50ul试剂1+50ul试剂2混合,37℃孵育10min,清洗;
第二步:加入预激发液及激发液,进行测试。
4.1.2抗体配对组合2(三试剂模式):    
待测抗原:PGII抗原(货号:EKY0732B)
样本/校准品:样品加样量20ul;
M试剂:链酶亲和素磁珠(SA)(货号:DEG0814A)稀释物,用量50ul/测试;
试剂1:胃蛋白酶原II(PGII)抗体(货号:EKN0290D)标记-生物素稀释物,用量50ul/测试;
试剂2:胃蛋白酶原II(PGII)抗体(货号:EKN0289D)标记-吖啶酯稀释物,用量50ul/测试;
反应条件:
第一步:20ul样本+50ul试剂1+50ul试剂2混合,37℃孵育9min;
第二步:加入50ul M试剂混合,37℃孵育9min,清洗;
第三步:加入预激发液及激发液,进行测试。
4.1.3抗体配对组合3(三试剂模式):    
待测抗原:PGII抗原(货号:EKY0732B)
样本/校准品:样品加样量20ul;
M试剂:链酶亲和素磁珠(SA)(货号:DEG0814A)稀释物,用量50ul/测试;
试剂1:胃蛋白酶原II(PGII)抗体(货号:EKN0289D)标记-生物素稀释物,用量50ul/测试;
试剂2:胃蛋白酶原II(PGII)抗体(货号:EKN0290D)标记-吖啶酯稀释物,用量50ul/测试;
反应条件:
第一步:20ul样本+50ul试剂1+50ul试剂2混合,37℃孵育9min;
第二步:加入50ul M试剂混合,37℃孵育9min,清洗;
第三步:加入预激发液及激发液,进行测试。
测试使用发光仪器:科斯迈SMART 500S。    
4.2化学发光(AP)平台    
4.2.1抗体配对组合4(两试剂模式):    
待测抗原:PGII抗原(货号:EKY0732B)
样本/校准品:样品加样量20ul;
试剂1:胃蛋白酶原II(PGII)抗体(货号:EKN0289E)包被-磁珠稀释物,用量50ul/测试;
试剂2:胃蛋白酶原II(PGII)抗体(货号:EKN0290E)标记-碱性磷酸酶稀释物,用量50ul/测试;
反应条件:
第一步:20ul样品+50ul试剂1+50ul试剂2混合,37℃孵育10min,清洗;
第二步:加入底物,进行测试。
4.2.2抗体配对组合5(三试剂模式):    
待测抗原:PGII抗原(货号:EKY0732B)
样本/校准品:样品加样量20ul;
M试剂:链酶亲和素磁珠(SA)(货号:DEG0814A)稀释物,用量50ul/测试;
试剂1:胃蛋白酶原II(PGII)抗体(货号:EKN0289E)标记-生物素稀释物,用量50ul/测试;
试剂2:胃蛋白酶原II(PGII)抗体(货号:EKN0290E)标记-碱性磷酸酶稀释物,用量100ul/测试;
反应条件:
第一步:20ul样本+50ul试剂1+100ul试剂2混合,37℃孵育10min;
第二步:加入50ul M试剂混合,37℃孵育5min,清洗;
第三步:加入底物,进行测试。
测试使用发光仪器:迎凯Shine i2900。    
4.3荧光免疫层析平台抗体配对组合5:    
待测抗原:PGII抗原(货号:EKY0732B)
反应条件:
样品+稀释液混匀(本次按照1:5稀释),上样,反应时间(10min-15min);
测试使用荧光仪器:和迈FIC-S100。    
5.产品信息    
产品名称                        
货号                        
推荐配对                        
AP酶标记物稀释液
DCD0519A
/
蛋白保护剂GH
DCL0009A
推荐使用浓度20%左右
PGII抗原稀释液
DCD0521A
/
胃蛋白酶原II(PGII)抗体
EKN0290D
胃蛋白酶原II(PGII)抗体(货号:EKN0290D)包被羧基磁珠+胃蛋白酶原II(PGII)抗体(货号:EKN0289D)标记吖啶酯(发光配对组合1)                        
胃蛋白酶原II(PGII)抗体(货号:EKN0290D)标记生物素+胃蛋白酶原II(PGII)抗体(货号:EKN0289D)标记吖啶酯+链酶亲和素磁珠(SA)(货号:DEG0814A)(发光配对组合2)                        
胃蛋白酶原II(PGII)抗体(货号:EKN0289D)标记生物素+胃蛋白酶原II(PGII)抗体(货号:EKN0290D)标记吖啶酯+链酶亲和素磁珠(SA)(货号:DEG0814A)(发光配对组合3)                        
胃蛋白酶原II(PGII)抗体(货号:EKN0289E)包被羧基磁珠+胃蛋白酶原II(PGII)抗体(货号:EKN0290E)标记碱性磷酸酶(发光配对组合4)                        
胃蛋白酶原II(PGII)抗体(货号:EKN0289E)标记生物素+胃蛋白酶原II(PGII)抗体(货号:EKN0290E)标记碱性磷酸酶+链酶亲和素磁珠(SA)(货号:DEG0814A)(发光配对组合5)                        
胃蛋白酶原II(PGII)抗体(货号:EKN0289E)标记荧光微球+胃蛋白酶原II(PGII)抗体(货号:EKN0290E)划膜(荧光配对组合6)                        
胃蛋白酶原II(PGII)抗体
EKN0289D
胃蛋白酶原II(PGII)抗体
EKN0289E
胃蛋白酶原II(PGII)抗体
EKN0290E
胃蛋白酶原(PGII)抗原
EKY0732B
 
胃蛋白酶原II(PGII)抗体
(货号:EKN0290D)包被羧基磁珠浓缩液
DKY1334A
 
胃蛋白酶原II(PGII)抗体(货号:EKN0290D)标记生物素浓缩液
DKY1334B
 
胃蛋白酶原II(PGII)抗体(货号:EKN0290D)标记吖啶酯浓缩液
DKY1334C
 
胃蛋白酶原II(PGII)抗体(货号:EKN0289D)标记生物素浓缩液
DKY1334D
 
胃蛋白酶原II(PGII)抗体(货号:EKN0289D)吖啶酯浓缩液
DKY1334E
 
胃蛋白酶原II(PGII)抗体
(货号:EKN0289E)包被羧基磁珠浓缩液
DKY1334F
 
胃蛋白酶原II(PGII)抗体(货号:EKN0289E)标记生物素浓缩液
DKY1334G
 
胃蛋白酶原II(PGII)抗体(货号:EKN0290E)标记碱性磷酸酶浓缩液
DKY1334H
 
胃蛋白酶原II(PGII)抗体(货号:EKN0289E)标记荧光微球浓缩液
DKY1334I
 
AMPPD 发光底物液(即用型)
DCD0517A
 
AMPPD 发光底物液(即用型)
DCD0517B
 
羧基磁性微球,1.5um
DEG0800C
 
链霉亲和素磁性微球,1.5um
DEG0814A-10ml
 
时间分辨荧光微球,羧基(200nm)
AEG0786B
 

 

公众号

400-021-8151