胃蛋白酶原II（PGII）-磁微粒化学发光法（AE/AP）/荧光免疫层析解决方案（含保护剂评估）

1.项目背景    

摘自《中国胃癌筛查与早诊早治指南（2022）》

PG是胃蛋白酶的无活性前体，可分为PGI和PGII种亚型。PGI主要由胃体和胃底腺的主细胞和颈黏液细胞分泌，而 PGII除由胃底腺分泌外，胃窦幽门腺和近端十二指肠 Brunner腺亦可分泌。当胃黏膜发生萎缩时，血清PGI水平和（或）PGI/II比值（PGR）降低。血清中约存在人体1%的PG，其血清水平可作为胃黏膜形态和功能状态的标志，联合Hp检测可识别出胃癌的高危个体。一项纳入27项人群筛查研究和15项针对特定高危人群（如萎缩性胃炎）研究、涉及约30万例受试者的Meta分析结果显示，在一般人群研究中血清PG（PGI≤70ng/ml，PGR≤3）检测诊断胃癌的灵敏度和特异度分别为77%和73%，在特定高危人群中灵敏度和特异度分别为57%和80%。 另有3项 Meta分析评估了PG检测对胃癌诊断的灵敏度和特异度，结果显示，血清PG检测对胃癌诊断的灵敏度和特异度分别为57%～69%和 73%～85%。

2.性能表现    

针对PGII的检测，西宝生物推出4种单克隆抗体和1种重组抗原适合化学发光（AE/AP）和荧光层析平台。具体性能如下

（以下评估仅代表在西宝生物的工艺体系下的验证，建议客户根据自身工艺进行抗体交叉配对验证）。

2.1化学发光（AE）平台：    

组合1（两试剂模式）：    

胃蛋白酶原II(PGII)抗体（货号：EKN0290D）包被羧基磁珠+胃蛋白酶原II(PGII)抗体（货号：EKN0289D）标记吖啶酯；    

组合2（三试剂模式）：    

胃蛋白酶原II(PGII)抗体（货号：EKN0290D）标记生物素+胃蛋白酶原II(PGII)抗体（货号：EKN0289D）标记吖啶酯+链酶亲和素磁珠（SA）（货号：DEG0814A）；    

组合3（三试剂模式）：    

胃蛋白酶原II(PGII)抗体（货号：EKN0289D）标记生物素+胃蛋白酶原II(PGII)抗体（货号：EKN0290D）标记吖啶酯+链酶亲和素磁珠（SA）（货号：DEG0814A）；    

线性范围：0.5ng/mL-100ng/mL；最低检出限：0.5ng/mL。

浓度值在1000ng/mL以内没有发现高剂量钩状效应(HOOK效应)。

   

   

   

2.2化学发光（AP）平台：    

组合4（两试剂模式）：    

胃蛋白酶原II(PGII)抗体（货号：EKN0289E）包被羧基磁珠+胃蛋白酶原II(PGII)抗体（货号：EKN0290E）标记碱性磷酸酶；    

组合5（三试剂模式）：    

胃蛋白酶原II(PGII)抗体（货号：EKN0289E）标记生物素+胃蛋白酶原II(PGII)抗体（货号：EKN0290E）标记碱性磷酸酶+链酶亲和素磁珠（SA）（货号：DEG0814A）。    

线性范围：0.5ng/mL-100ng/mL；最低检出限：0.5ng/mL。

浓度值在1000ng/mL以内没有发现高剂量钩状效应(HOOK效应)。

   

   

2.3荧光免疫层析平台：    

组合6：    

胃蛋白酶原II(PGII)抗体（货号：EKN0289E）标记荧光微球+胃蛋白酶原II(PGII)抗体（货号：EKN0290E）划膜；    

线性范围：0.5ng/mL-100ng/mL；最低检出限：0.5ng/mL。

浓度值在1000ng/mL以内没有发现高剂量钩状效应(HOOK效应)。

   

2.4 稳定性评估    

2.4.1 碱性磷酸酶标记抗体稳定性    

A）胃蛋白酶原II(PGII)抗体（货号：EKN0290E）标记碱性磷酸酶浓缩液采用AP酶标记物稀释液（货号：DCD0519A）稀释到合适浓度后，进行37℃热稳定性实验。如表1所示，PGII ALP酶工作液37℃储存热加速3天与2℃-8℃储存3天发光值平均降幅超过30%以上，表明PGII ALP酶工作液热稳定性差。

表1 PGII ALP酶工作液热稳定性3天数据（不含保护剂）    

B）在AP酶标记物稀释液（货号：DCD0519A）中添加20%左右的蛋白保护剂GH（货号：DCL0009A）配成新的AP酶稀释液，继续进行胃蛋白酶原II(PGII)抗体（货号：EKN0290E）标记碱性磷酸酶的37℃热稳定性实验。如表2所示，PGII ALP酶工作液37℃储存热加速7天与2℃-8℃储存7天发光值平均降幅在10%左右，表明PGII ALP酶工作液热稳定性良好。本实验表明蛋白保护剂GH（货号：DCL0009A）对PGII ALP酶工作液的稳定性有很大帮助。

表2 PGII ALP酶工作液热稳定性7天数据（含保护剂）    

2.4.2 PGII抗原稳定性    

A）采用PGII抗原稀释液（货号：DCD0521A）将PGII抗原（货号：EKY0732B）稀释成3个梯度（液体型），进行37℃热稳定性实验。如表3所示，PGII抗原稀释梯度（液体型）37℃热加速3天与2℃-8℃储存3天发光值平均降幅超过80%以上，表明PGII抗原稀释梯度（液体型）热稳定性非常差。

表3 PGII抗原稀释梯度（液体型）热稳定性3天数据    

B）采用PGII抗原稀释液（货号：DCD0521A）将PGII抗原（货号：EKY0732B）稀释成3个梯度做冻干（冻干型），进行37℃热稳定性实验。如表4所示，PGII抗原稀释梯度（冻干型）37℃热加速7天与2℃-8℃储存7天发光值平均降幅在5%左右，表明PGII抗原稀释梯度（冻干型）热稳定性良好。

表4 PGII抗原稀释梯度（冻干型）热稳定性7天数据    

3.临床相关性    

3.1化学发光（AE）平台：    

西宝生物发光（AE）平台PGII抗体配对组合1（两试剂模式）与迈瑞医疗PGII试剂（化学发光法）赋值的临床样本相关性R2>0.95，相关性良好；

   

   

西宝生物发光（AE）平台PGII抗体配对组合2（三试剂模式）与迈瑞医疗PGII试剂（化学发光法）赋值的临床样本相关性R2>0.95，相关性良好。

   

   

西宝生物发光（AE）平台PGII抗体配对组合3（三试剂模式）与迈瑞医疗PGII试剂（化学发光法）赋值的临床样本相关性R2>0.95，相关性良好。

   

   

3.2化学发光（AP）平台：    

西宝生物发光（AP）平台PGII抗体配对组合4（两试剂模式）与迈瑞医疗PGII试剂（化学发光法）赋值的临床样本相关性R2>0.95，相关性良好；

   

   

西宝生物发光（AP）平台PGII抗体配对组合5（三试剂模式）与迈瑞医疗PGII试剂（化学发光法）赋值的临床样本相关性R2>0.95，相关性良好。

   

   

3.3荧光免疫层析平台：    

西宝生物荧光平台PGII抗体配对组合6与迈瑞医疗PGII试剂（化学发光法）赋值的临床样本相关性（≤20ng/mL）R2在0.90左右，相关性较好；（＜100ng/mL）R2>0.95，相关性良好。

   

   

4. 测试方案    

4.1化学发光（AE）平台    

4.1.1抗体配对组合1（两试剂模式）：    

待测抗原:PGII抗原（货号：EKY0732B）

样本/校准品:样品加样量20ul；

试剂1：胃蛋白酶原II(PGI)抗体（货号：EKN0290D）包被-磁珠稀释物，用量50ul/测试；

试剂2：胃蛋白酶原II(PGI)抗体（货号：EKN0289D）标记-吖啶酯稀释物，用量50ul/测试；

反应条件：

第一步：20ul样品+50ul试剂1+50ul试剂2混合，37℃孵育10min，清洗；

第二步：加入预激发液及激发液，进行测试。

4.1.2抗体配对组合2（三试剂模式）：    

待测抗原:PGII抗原（货号：EKY0732B）

样本/校准品:样品加样量20ul；

M试剂：链酶亲和素磁珠（SA）（货号：DEG0814A）稀释物，用量50ul/测试；

试剂1：胃蛋白酶原II(PGII)抗体（货号：EKN0290D）标记-生物素稀释物，用量50ul/测试；

试剂2：胃蛋白酶原II(PGII)抗体（货号：EKN0289D）标记-吖啶酯稀释物，用量50ul/测试；

反应条件：

第一步：20ul样本+50ul试剂1+50ul试剂2混合，37℃孵育9min；

第二步：加入50ul M试剂混合，37℃孵育9min，清洗；

第三步：加入预激发液及激发液，进行测试。

4.1.3抗体配对组合3（三试剂模式）：    

待测抗原:PGII抗原（货号：EKY0732B）

样本/校准品:样品加样量20ul；

M试剂：链酶亲和素磁珠（SA）（货号：DEG0814A）稀释物，用量50ul/测试；

试剂1：胃蛋白酶原II(PGII)抗体（货号：EKN0289D）标记-生物素稀释物，用量50ul/测试；

试剂2：胃蛋白酶原II(PGII)抗体（货号：EKN0290D）标记-吖啶酯稀释物，用量50ul/测试；

反应条件：

第一步：20ul样本+50ul试剂1+50ul试剂2混合，37℃孵育9min；

第二步：加入50ul M试剂混合，37℃孵育9min，清洗；

第三步：加入预激发液及激发液，进行测试。

测试使用发光仪器:科斯迈SMART 500S。    

4.2化学发光（AP）平台    

4.2.1抗体配对组合4（两试剂模式）：    

待测抗原:PGII抗原（货号：EKY0732B）

样本/校准品:样品加样量20ul；

试剂1：胃蛋白酶原II(PGII)抗体（货号：EKN0289E）包被-磁珠稀释物，用量50ul/测试；

试剂2：胃蛋白酶原II(PGII)抗体（货号：EKN0290E）标记-碱性磷酸酶稀释物，用量50ul/测试；

反应条件：

第一步：20ul样品+50ul试剂1+50ul试剂2混合，37℃孵育10min，清洗；

第二步：加入底物，进行测试。

4.2.2抗体配对组合5（三试剂模式）：    

待测抗原:PGII抗原（货号：EKY0732B）

样本/校准品:样品加样量20ul；

M试剂：链酶亲和素磁珠（SA）（货号：DEG0814A）稀释物，用量50ul/测试；

试剂1：胃蛋白酶原II(PGII)抗体（货号：EKN0289E）标记-生物素稀释物，用量50ul/测试；

试剂2：胃蛋白酶原II(PGII)抗体（货号：EKN0290E）标记-碱性磷酸酶稀释物，用量100ul/测试；

反应条件：

第一步：20ul样本+50ul试剂1+100ul试剂2混合，37℃孵育10min；

第二步：加入50ul M试剂混合，37℃孵育5min，清洗；

第三步：加入底物，进行测试。

测试使用发光仪器:迎凯Shine i2900。    

4.3荧光免疫层析平台抗体配对组合5：    

待测抗原:PGII抗原（货号：EKY0732B）

反应条件：

样品+稀释液混匀（本次按照1:5稀释），上样，反应时间（10min-15min）；

测试使用荧光仪器:和迈FIC-S100。    

5.产品信息